Acte 1 - Xipharès, fils de Mithridate, vient d'apprendre la mort de son père et le risque d'une prochaine victoire de Rome. Il craint une trahison de son frère Pharnace. Xipharès voit Monime, fiancée de Mithridate, à qui il déclare son amour. Survient Pharnace, qui compte hériter en même temps du royaume de son père et de sa fiancée. On apprend alors que Mithridate n'est pas mort : il va arriver d'un moment à l'autre. Acte 2 - Mithridate reçoit la confirmation de la perfidie de son fils Pharnace et annonce sa volonté de l'exécuter. Monime se contraint à épouser Mithridate, mais celui-ci la soupçonne d'aimer Pharnace. Monime avoue enfin à Xipharès qu'elle l'aime, mais qu'elle est résolue à suivre les volontés de Mithridate. Acte 3 - Mithridate annonce à ses fils qu'il va tenter d'envahir l'Italie. Mithridate ordonne à Pharnace d'aller épouser la fille du roi parthe, mais il refuse. Comme Mithridate le fait arrêter, il révèle que Xipharès est amoureux de Monime. Mithridate prétend à Monime qu'il veut lui faire épouser Xipharès et comprend à sa réaction qu'elle l'aime. Acte 4 - Xipharès veut fuir mais Monime lui révèle que c'est elle qui a révélé leur amour à Mithridate. Ce dernier décide d'épouser Monime avant de partir pour l'Italie en échange de son pardon. Elle refuse. Mithridate ne sait plus s'il doit punir Xipharès, lui et Monime ou aucun des deux. Pendant ce temps, Pharnace révèle le projet d'attaque de l'Italie aux Romains. Acte 5 - Les Romains attaquent le palais. Un domestique de Mithridate apporte à Monime du poison afin qu'elle se suicide, ce qu'elle accueille bien car une rumeur court que Xipharès est mort. Survient un contre-ordre : Mithridate, qui se voit vaincu, vient de s'administrer du poison et s'est transpercé d'une épée en pardonnant à Monime. Xipharès, quant à lui, parvient à repousser l'attaque des Romains. Avant d'expirer, Mithridate, fier de la dernière victoire comme de son fils, unit Monime et Xipharès et leur conseille de s'enfuir.